清潔 HPLC 色譜柱的正確方法

我們都知道高效液相色譜柱有一個有限的生命周期，即使經(jīng)過良好的清理和儲存，它們也將達(dá)到其生命周期的終點。但是，您可以采取某些措施來zui大限度地延長色譜柱的使用壽命。

我們所有的 HPLC 色譜柱都使用運(yùn)輸溶劑運(yùn)送給您。對于反相色譜柱，這通常由某種有機(jī)物（乙腈或甲醇）和水組成。對于此類色譜柱，在安裝之前，您可以用流動相沖洗溶劑管線，安裝新色譜柱，用流動相調(diào)節(jié)色譜柱，然后您就可以開始分析了。

對于在反相和正相條件下運(yùn)行的色譜柱，您需要注意運(yùn)輸溶劑并確認(rèn)您的流動相溶劑與運(yùn)輸溶劑混溶/兼容。如果沒有，您需要使用溶劑切換程序.

準(zhǔn)備好使用 HPLC 色譜柱后，您可以  通過安裝在線過濾器、捕集柱來幫助保持其完整性,和一個保護(hù)柱。這些將有助于防止污染物損壞您的 HPLC 分析柱。然而，當(dāng)污染確實積累時，有幾種方法可以對抗它。

清洗 HPLC 色譜柱
使用色譜柱后，始終建議在存放前清潔色譜柱。清洗程序通常涉及使用zui接近色譜柱上zui后一個溶劑系統(tǒng)的等度/梯度清洗,但用 HPLC 級水代替緩沖液。這將確保從色譜柱中去除緩沖液成分。然后，您可以增加洗滌中的有機(jī)物百分比，以進(jìn)一步去除任何疏水性雜質(zhì)。

反沖洗 HPLC 色譜柱
如果您發(fā)現(xiàn)峰形變差并伴隨反壓增加，建議對色譜柱進(jìn)行反向沖洗。在反向沖洗之前，重要的是要確保您的流動相或柱內(nèi)溶劑與您的清洗溶劑混溶，并且您的流速不超過色譜柱典型推薦流速的一半。詳細(xì)程序,按照我們的說明色譜柱保養(yǎng)指南. 您可以使用以下公式確定色譜柱體積： V = pr2L 其中 V 是以 mL 為單位的色譜柱體積，r 是以 cm 為單位的色譜柱半徑，L 是以 cm 為單位的色譜柱長度。

在使用后正確清洗反相 HPLC 色譜柱時，首先將您的流動相更換為 95% HPLC 級水和 5% 乙腈，然后以大約 10 倍的柱體積通過 HPLC 色譜柱以一半的流速沖洗. 這將移除任何留在 HPLC 柱中的緩沖液。然后，您可以根據(jù)需要逐步移動,將有機(jī)物含量增加到約 95% 乙腈和 5% 水，反沖洗后，將色譜柱正向連接，并在使用前與常規(guī)流動相連接。請注意，在反向沖洗色譜柱時,斷開色譜柱與檢測器的連接。了解如何正確反沖洗您的 HPLC 色譜柱使用這些技巧.

高效液相色譜柱存儲
使用后正確存放色譜柱也很重要，尤其是要存放很長時間. 當(dāng)您的 HPLC 色譜柱仍含有任何緩沖液或離子對試劑時，請務(wù)必不要將其存放起來。為確保這一點，沖洗五個柱體積s沒有緩沖液的流動相通過 HPLC 色譜柱。對于具有離子對試劑的色譜柱，可能需要延長清洗時間以將它們從色譜柱中完·全去除。洗完后反著放d乙腈/水 (65:35 v/v) 相色譜柱，可使用甲醇代替乙腈，正相色譜柱為 100% 己烷或 IPA，離子交換色譜柱為 100% 甲醇,和 HILIC 色譜柱，乙腈/水 (80:20 v/v)